💉عد كرات الدم الحمراء


1) شروط وأحكام سحب العينة واحتياطات قبل التحليل

  1. نوع العينة: دم وريدى كامل (Whole blood) مضاف إليه مضاد للتخثر EDTA (أفضل خيار شائع للأعداد الدموية).
  2. زمن التحليل: يفضل تحليل العينة خلال 6 ساعات من السحب عند حفظها مبردة (4–8°C) لتقليل تكسير الخلايا؛ إلا أن بعض المختبرات تحلل حتى 24 ساعة بشرط عدم وجود انحلال.
  3. مزج العينة: بعد السحب، قلب الأنبوب بلطف 8–10 مرات لتوزيع مضاد التخثر؛ لا تهز بعنف لتجنب تكسير الخلايا.
  4. حجم الدم: الكمية المعتادة لأنبوب EDTA (2–5 mL) كافية.
  5. حالات يمنع فيها/تؤثر على العد التقليدي:
    • عينات بها كتل/خثرات (Clots) → غير صالحة.
    • عينات مريضة بالتهابات شديدة، أو ملوّثة بالليبوليميا/المواد الصفراء الشديدة قد تؤثر على القراءة.
    • عينات مأخوذة من أذين وريدي أو من نفس الذراع بعد إعطاء سوائل كبيرة قد تعطى نتيجـة مخففة.
  6. الحماية الشخصية: استخدام قفازات، نظارات واقية، وتعامل مع عينات الدم كمواد مُعدية.
  7. معدات ونظافة: استخدام شريحة عد ونظيفة جداً وخالية من خدوش أو غبار؛ تجفيف السطح قبل التحميل.
  8. معلومات للمسؤول: سجل وقت السحب، نوع المضاد، ووقت التحليل.

2) المواد والكواشف والمعدة المطلوبة

  • شريحة عد (Neubauer hemocytometer) ونظارة التغطية (cover slip) المناسبة (سمك وسطح مستوٍ).
  • مذاب (Diluting fluid): محلول مناسب لحفظ الخلايا وفصلها (تقليدياً Hayem's solution أو Isotonic saline 0.9% في طرق بسيطة). (في المختبرات الحديثة تُستخدم محاليل قياسية متاحة تجارياً).
  • ماصة دقيقة (Pipette) مدرّجة (مثلاً: 0.02 mL أو ماصة عداد الدم من النوع المعياري) أو micropipette وميكروبيبت (تعتمد الطريقة) — المهم دقة المعرِّفة.
  • أنابيب زجاجية وقارورات خلط، مناديل خالية من الوبر، ميكروسكوب ضوئي بمكبر مناسب (400× عادةً أو 1000× مع زيت للأنسجة الدقيقة).
  • سجلات وورقة عمل للحساب.

3) مبدأ الاختبار باختصار

نقوم بتخفيف دم معروف الحجم إلى محلول معرَّف بحيث يمكن عد الخلايا المرئية تحت ميكروسكوب داخل منطقة مساحية ومعروفة الحجم في شريحة العد. بعد عد عدد الخلايا ضمن مجموعة من المربعات المعروفة المساحة والعمق، نحسب تركيز الخلايا باستخدام عامل التخفيف وحجم الميدان المحسوب.

4) مواصفات شريحة العد (Neubauer) والمعاملات الهندسية المهمة

  • الشريحة (Neubauer improved): تحتوي على شبكة مركزية كبيرة مساحتها 1 mm² ومقسمة إلى 25 مربعًا متساويًا (كل مربع كبير مساحته 0.04 mm²).
  • عمق الغرفة (depth) بين الشريحة والغطاء = 0.1 mm (معيارى).
  • حجم كل من هذه المربعات الصغيرة (الـ 25 مربع):
    • المساحة = 0.04 mm².
    • الحجم = المساحة × العمق = 0.04 mm² × 0.1 mm = 0.004 mm³ = 0.004 µL.
  • عند عد 5 من هذه المربعات الصغيرة (الطريقة الشائعة لRBC) يكون الحجم الإجمالي المحسوب = 5 × 0.004 = 0.02 mm³ = 0.02 µL.
  • هذه القيم هي أساس صيغة الحساب النهائية.

5) تخفيف العينة (Dilution) المعياري وطريقة التحضير

  • التخفيف الشائع لعد RBC: 1 : 200 (واحد جزء دم إلى 199 جزء محلول) — هذا هو تخفيف مستخدم تقليدياً.
  • مثال عملي: لتحضير 1 mL مخلوط بتخفيف 1:200: أضف 5 µL دم إلى 995 µL من محلول التخفيف OR أضف 10 µL دم إلى 1990 µL، أو استخدم الماصة المخصصة (بعض المباخر/عدّادات الدم توفر أنبوب وقطارة ل1:200 مباشرة).
  • امزج بلطف لتجانس.

6) خطوات العد الميكروسkopي (سرد عملي)

  1. ضع غطاء الشريحة (cover slip) على شريحة العد بحيث يتكوّن فراغ مستوٍ بالعمق 0.1 mm.
  2. أحضر العينة المخففة (1:200) وامزجها بلطف قبل التحميل.
  3. ضع قطرة من المخلوط عند فتحة الشريحة (على جانب الشبكة)، دع السائل يسحب تحت الغطاء بالتساوي — لا تملأ أو تفرط لتجنب فقاعات.
  4. اترك الشريحة لتستقر دقيقة أو دقيقتين حتى تتوزع الخلايا وتستقر (لا تنتظر طويلاً جداً).
  5. ضع الشريحة على الميكروسكوب، استخدم مكبر ×10 للعثور على الشبكة ثم استخدم ×40 أو ×100 (زيت إن لزم) للعد.
  6. اختر المربعات التي ستحسب: عادةً 5 من مربعات الـ25 الموجودة في المربع المركزي (تُعد الطريقة القياسية).
  7. قاعدة الحواف (Border rule): لتجنّب العد المزدوج: عد الخلايا التي تلامس الحد العلوى أو الأيسر من المربع، استبعد الخلايا التي تلامس الحد السفلى أو الأيمن (قاعدة شائعة – Top & Left include; Bottom & Right exclude). اتفق على قاعدة واحدة وطبقها باستمرار.
  8. سجل عدد الخلايا في كل مربع من الخمسة، واحسب المجموع.
  9. كرر العد في شريحتين مستقلتين (= عد مكرر) للحصول على متوسط ولتقويم التكرارية.

7) المعادلة الحسابية الأساسية وصيغة النتيجة

  • حجم الخمسة مربعات المحسوب = 0.02 µL.
  • عامل التخفيف (DF) = 200.
  • لذلك:
المعادلة الأساسية:

عدد كرات الدم الحمراء (في كل ميكرولتر) =
عدد الخلايا التي تم عدّها × عامل التخفيف ÷ حجم المربعات التي تم عدّها (بالمكرولتر)


---

🔹 القيم الثابتة في العد القياسي:

عامل التخفيف (Dilution factor) = 200

حجم الخمسة مربعات الصغيرة في شريحة العد = 0.02 ميكرولتر



---

🔹 بالتعويض في المعادلة:

RBC (خلايا / ميكرولتر) = عدد الخلايا × 200 ÷ 0.02


---

🔹 بعد التبسيط:

RBC (خلايا / ميكرولتر) = عدد الخلايا × 10,000


---

🔹 لتحويل النتيجة إلى الوحدة الدولية (×10¹² / لتر):

RBC (×10¹² / لتر) = عدد الخلايا × 10,000 × 10⁻⁶
= عدد الخلايا × 0.01

8) مثال حسابي توضيحي

  • افترضي قمت بعد 5 مربعات ووجدت المجموع = 520 خلية.
  • بالتالي: RBC = 520 × 10,000 = 5,200,000 /µL.
  • بوحدة ×10¹²/L: 5,200,000 ×10⁻⁶ = 5.2 ×10¹²/L.

9) الضبط النوعي والتحقق (Quality Control)

  1. عد مكرّر: نفّذ العد مرتين على الأقل وخذ المتوسط.
  2. تفاوت مقبول: فرق بين العدّتين يجب أن يكون صغيراً (مثلاً أقل من ±10% حسب سياسة المختبر).
  3. مراقبة المحلول: استخدم محاليل مرجعية/عينات قياسية بتركيز معروف للتأكد من دقة التقنية.
  4. فحص التوزيع: إذا كانت الخلايا غير موزعة بالتساوي أو وجود فقاعات/تكتلات → إعادة التحضير.
  5. تسجيل الملاحظات: حالات الهيموليز، لِبِّوليميا، وجود شبكات/��تخلفات يجب تدوينها لأنّها تؤثر على العد الآلي واليدوي.

10) مصادر الأخطاء الشائعة وكيفية تجنبها

  • خطأ في التخفيف (مباعدة/قِطْر غير دقيقة) → نتائج خاطئة؛ استخدمي ماصات معادلة ومعايرة.
  • فقاعات هوائية تحت الغطاء → إزالة و إعادة تحميل.
  • خثرات/عِقيدات في الدم → غير صالحة؛ إذا ظهرت كتل أعدِ سحب العينة.
  • وقت تخزين طويل → كسر الخلايا (hemolysis) وخفض العد؛ ثم تحليل سريعاً أو رمي العينة.
  • حساب مربعات خاطئ/استخدام عدد غير موحد من المربعات → اتفقي على عدد مربعات (5) وطبّقي دائماً.
  • انحراف عن قاعدة الحواف → تناقض بين العدّات؛ اتبعي قاعدة الحدود بدقة.
  • تلوث المحلول أو تغيير تراكيبه → يؤثر على حفظ الخلايا/شكلها؛ استخدمي محاليل معتمدة ومخزنة بشكل صحيح.

11) متى نلجأ للطريقة اليدوية بدل الآلي؟

  • عندما يكون الجهاز الآلي معطلاً.
  • في حالات وجود شك في قراءات الجهاز (على سبيل المثال: ارتباك بسبب التكتلات، أو أجسام غريبة تُشوه القياس).
  • للتدريب التعليمي لطلبة أو كتحقق في حالات سريرية خاصة (تداخلات كبيرة مثل وجود كثرة كريات غير طبيعية).

12) نقاط تطبيقية صغيرة ومفيدة للمختبر والطالب

  • دوّن دائمًا: وقت السحب، وقت التخفيف، اسم المحلول وتركيبه/المرجع التجاري، ومن قام بالعد.
  • وثّق أي ملاحظات شكلية (احمرار، شحوب، تكتلات، لِبِّوليميا).
  • قيمي النتائج سريريًا: عمل عد يدوي هو مهارة مفيدة لكنه أقل إنتاجية من الآلي ولا يغني عنه في مختبرات كبيرة

تعليقات

إرسال تعليق